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細菌呼吸鏈復合物II活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
時間:2021/9/7 點擊次數:1513

 細菌呼吸鏈復合物II活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

  細菌呼吸鏈復合物II琥珀酸-輔酶Q還原酶)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物二氯酚靛酚,通過反應系統測定樣品中二氯酚靛酚還原后吸光峰值的變化,即采用比色法測定樣品中酶活性的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種野生、培養或病原性細菌膜蛋白懸液樣品的琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異性活性檢測。產品不含污染性蛋白酶,嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,反應優化,檢測敏感。

 

技術背景

 

細菌呼吸鏈復合II,通常稱為琥珀酸-輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶Succinate-Coenzyme Q Oxidoreductase;Succinate Dehydrogenase;SQR),結構和功能上類同于線粒體復合物II,膜結合型,細菌需氧呼吸鏈與三羧酸循環鏈接的主要元素含有四個亞,鐵硫中心(Fe-S clusters,輔因子為黃素(flavin)。其最特征性的酶活性是噻吩甲酰三氟丙酮thenoyltrifluoroacetone;TTFA敏感的琥珀酸-輔酶Q還原酶。復合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化為富馬酸(fumarate,細菌內電子由供體黃素傳遞到內膜上輔酶Q受體(泛醌;ubiquinone)的能量轉移反應,進行呼吸鏈傳遞。基于琥珀酸底物,通過琥珀酸-輔酶Q還原酶的催化,氧化為富馬酸,同時氧化型二氯酚靛酚dichlorophenal-indophenol;DCPIP轉化為還原型二氯酚靛酚dichlorophenal-indophenol;DCPIPH2,在分光光度儀下產生吸光峰值的變化600nm 長),由此定量測定琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異活性。其反應系統是:

 

 

產品內容

 

  緩沖液(Reagent A         毫升

  反應液(Reagent B         毫升

  陰性液(Reagent C           毫升

  底物液(Reagent D          微升

產品說明書               1

 

保存方式

 

保存在-20冰箱里,避免反復凍融;  反應液(Reagent B)和  底物液(Reagent D),避免光照,有效保證6

 

用戶自備

 

比色皿:用于比色的容器

分光光度儀:用于比色分析

培養箱:用于孵育反應物

 

實驗步驟

 

實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;  緩沖液(Reagent A室溫預熱;  反應液(Reagent B  底物液(Reagent D注意避光。然后進行下列操作。

 

一、 測定準備

 

1. 準備好待測樣品(例如細菌膜蛋白樣品等),置于冰槽里 

2. 設定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為600nm,間隔60秒,讀數6次(共5分鐘),并置零


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